中文名稱：HY STEMCEL MSC細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 現(xiàn)貨供應(yīng)

英文名稱：CCGmHuM® E8 Cocktail human MSCs Serum-Free Medium

貨號：E8725F

規(guī)格：450+50mL/套

產(chǎn)品組份:

本產(chǎn)品包括以下8種明確公開組份:

DMEM/F12 base        Essential GFs

Glutamine             Transferrin

NaHCO3               Albumin

Selenium              Insulin

脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞的分離:

1. 人脂肪組織來自脂肪抽吸患者的廢棄脂肪組織。

2. 無菌PBS反復(fù)漂洗除菌。

3. 將脂肪組織轉(zhuǎn)移至50mL或250mL離心管,加入等體積的使用alpha-MEM配制的jiao原酶溶液,使其終濃度達(dá)到0.1%(重量/體積)。

4. 37℃,搖床(120rpm)消化2小時以上。

5. 室溫靜置10分鐘,吸除上層油滴。

6. 離心,800g,10分鐘,收集消化細(xì)胞。

7. PBS洗滌一次,500g,10分鐘。MSCs無血清完 .全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞。

8. 計細(xì)胞數(shù),調(diào)整細(xì)胞濃度,按照5~10×105/cm2底面積接種。

9. 次日觀察,如無污染,繼續(xù)培養(yǎng)至培養(yǎng)基顏色變黃,或貼壁細(xì)胞密度達(dá)到30%以上。補充新鮮的MSC無血清完.全培養(yǎng)基。

10. 細(xì)胞密度達(dá)到80%左右時,按照以下步驟傳代培養(yǎng)。

間充質(zhì)干細(xì)胞的傳代:

1. 吸去培養(yǎng)液。

2. 用1×PBS洗滌細(xì)胞2次,以去除殘留的培養(yǎng)液。

3. 加入PBS,之后加入0.25%Trypsin-0.1%EDTA,PBS與胰dan白酶體積比為4:1,兩者總量以覆蓋培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶表面為宜。輕輕旋轉(zhuǎn),置37℃培養(yǎng)箱中消化3~5分鐘。用手輕拍培養(yǎng)器皿的壁,顯微鏡下可見絕大部分細(xì)胞變圓,極少量細(xì)胞貼壁仍呈紡錘形,極少量細(xì)胞已經(jīng)懸浮即可終止消化。依據(jù)不同批次胰dan白酶活性不同,消化的時間以顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓為準(zhǔn),但是,推薦消化時間不低于3分鐘。

4. 立即加入等體積的間充質(zhì)干細(xì)胞完.全培養(yǎng)液,用吸管吸取液體,反復(fù)吹打培養(yǎng)器皿底壁,使細(xì)胞 脫離瓶皿底壁。

5. 離心(250g,5分鐘),吸去上清液。

6. 用2~3mL間充質(zhì)干細(xì)胞的完.全培養(yǎng)液重懸細(xì)胞。

7. 按照6000個細(xì)胞/cm2的密度來接種細(xì)胞。

8. 加足夠的間充質(zhì)干細(xì)胞的完.全培養(yǎng)液,在37℃,5% CO2和 相對濕度的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

中文名稱：HY STEMCEL MSC細(xì)胞無血清培養(yǎng)基 現(xiàn)貨供應(yīng)

英文名稱：CCGmHuM® E8 Cocktail human MSCs Serum-Free Medium

貨號：E8725F

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