本試劑盒提供全套試劑，適用于從各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞（原代或傳代細(xì)胞、貼壁或懸浮細(xì)胞等）和各種實(shí)體軟組織（如腦、脊髓、神經(jīng)結(jié)或纖維、脂肪、肝臟、消化道、腎臟、心臟、肌肉、血管、結(jié)締組織）提取總蛋白。提取過程簡單方便，無須超速離心機(jī)。本試劑盒含有的du特變性劑能夠溶解細(xì)胞膜包括細(xì)胞質(zhì)膜和核膜。提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白質(zhì)電泳、免疫共沉淀等蛋白研究。
使用方法：
A. 細(xì)胞總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取5-10×106個(gè)細(xì)胞，在4℃，500 g條件下離心5-10分鐘，小心吸取培養(yǎng)基，盡可能吸干，收集細(xì)胞。
3. 用冷PBS洗滌細(xì)胞兩次，每次洗滌后盡可能吸干上清。
4. 每5×106個(gè)細(xì)胞中加入500 μl冷的裂解液，混勻后，在4℃條件下振蕩15-20分鐘。
5. 在4℃，16,000 g條件下離心15分鐘。
6. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
B. 組織總蛋白提取
1. 每500 μl裂解液，在使用前數(shù)分鐘內(nèi)加入5 μl PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM。
2. 取100 mg組織樣本剪碎，加入裂解液，用組織勻漿器勻漿至無明顯肉眼可見固體。
3. 將組織勻漿吸入另一預(yù)冷的干凈離心管中，在4℃，16000 g條件下離心5分鐘。
4. 快速將上清轉(zhuǎn)移至另一預(yù)冷的干凈離心管，即可得到總蛋白。
上述蛋白提取物可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，或分裝后于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/div>
注意事項(xiàng)：1. 實(shí)驗(yàn)過程中的所有試劑可冰上預(yù)冷；所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。
2. 整個(gè)過程須保持樣品處于低溫狀態(tài)。
3. 蛋白濃度用BCA法測定 。
以上就是蛋白提取試劑盒的使用方法，以上知識(shí)僅供參考，希望對(duì)您有所幫助！
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